Научете повече за процеса на изработване на digene HPV теста от следващата видео презентация.
Етапи на изработване на HC2 HPV ДНК теста
Стъпка 1
Денатурация. Пробите претърпяват лизис в специален буфер, на водна баня, при което наличните цервикални клетки и вирусни частици се разрушават и двойно верижните ДНК молекули дисоциират до единични вериги.
Стъпка 2
Хибридизация. Към пробите се добавя специална РНК-сонда – коктейл от РНК фрагменти, съответстващи на геномите на 13-те изследвани високо рискови типа HPV. При наличие на някой от тези 13 типа в пробата, РНК-сондата полепва по вирусната ДНК и се образуват двойно верижни ДНК:РНК молекули.
Стъпка 3
Захващане (“Capture”). Пробите се пренасят в специална плака, чиито гнезда са покрити с антитела, специфични към ДНК:РНК молекули. При наличие на такива ДНК:РНК хибриди, те полепват по стените на плаката. Всички останали ДНК и РНК молекули остават в разтвора.
Стъпка 4
Добавяне на второ антитяло. То също е специфично към ДНК:РНК хибриди и се свързва с тях, ако са налице в пробата. Второто антитяло е свързано с ензим – алкална фосфатаза – който по-късно генерира хемилуминесцентния сигнал.
Стъпка 5
Промиване. Всички несвързани молекули от второто антитяло се промиват щателно, за да се предотврати генерирането на фалшиво позитивни сигнали.
Стъпка 6
Добавяне на сигнален реагент. Представлява субстрат, които се разрушава от алкалната фосфатаза, свързана с второто антитяло и дава луминесцентен продукт, който се детектира от луминометър.